Lysotracker探针是向酸性荧光探针，用于活细胞内酸性细胞器的标记和示踪。这些探针具有几个重要特征，包括高度选择靶向酸性细胞器和纳摩尔浓度有效标记活细胞。另外，LysoTracker系列有几种荧光颜色，特别适合用于多色标记实验。

Lysotracker探针，含一连接到弱碱基上的荧光素，中性pH下呈部分质子化，能够自由穿透细胞膜且典型聚集在球形细胞器上。研究发现，Lysotracker探针必须在极低浓度（通常约50nM）下才能获得优异的选择性。这些探针的滞留机制虽然没有被完全研究透，但很可能与酸性细胞器的质子化和滞留性有关，即使后续的弱碱性细胞渗透化合物处理细胞通常不会可逆化染色结果。Lysotracker探针的内吞化动力学研究显示染料进入活细胞的摄入速率仅几秒即可。然而，这些溶酶体探针会导致溶酶体被碱化，比如长期孵育会诱使溶酶体pH的增加。因此，建议成像前用探针孵育细胞的时间仅1-5min就好。

LysoTracker Deep Red是对活细胞中的酸性细胞器进行标记和示踪的一种深红色荧光染料，具有647/668 nm的最大激发/发射波长，使用与Cy5或MitoTracker Deep Red相同的滤片进行检测即可。本品为DMSO储存液，浓度为1mM。用于活细胞的溶酶体染色，建议工作浓度为50-75 nM，需根据实际情况做优化调整。

产品特征

1） 外观：蓝色溶液

2） 浓度：1mM in DMSO

3） 亚细胞定位：溶酶体

4） 颜色：远红外

5） 检测仪器：荧光显微镜、荧光成像仪、显微镜

6） Ex/Em：647/668 nm

注意事项

1） 整个操作过程中注意避光。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。第一次使用请将本品按单次用量分装保存，≤-20°C避光干燥保存，尽量避免反复冻融。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1. 工作液的配制

利用生长培养基或合适的缓冲液将1mM储存液稀释至工作浓度，工作液需现配现用。对于Lysotracker系列溶酶体探针，推荐工作液浓度为50-75nM；

【注意】：

1）为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

2）若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，会观察到荧光信号的衰减和细胞的空泡化现象。

2.染色步骤（贴壁细胞）

1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

2）待细胞生长到合适密度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针培养基（必须完全覆盖住细胞），在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3）利用不含探针的新鲜培养基替换上述染色液，并且用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察（见附表1）。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。

3.染色步骤（悬浮细胞）

1）离心沉淀细胞，吸除上清。

2）利用适量 37℃预热的含探针培养基重悬细胞，在适合特定细胞类型的生长条件下孵育细胞30min-2h（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。

3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养基重悬细胞。

4）用装有合适滤片的荧光显微镜进行观察。若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间，使得染料能聚集在溶酶体上。