MitoSOX红色线粒体超氧化物荧光探针（MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator）是二氢乙啶（dihydroethidum，DHE）的一种阳离子衍生物，特别设计高度特异性检测活细胞线粒体超氧化物。

MitoSOX Red是一种特异性靶向活细胞线粒体的新型荧光探针，具细胞膜渗透性，且能快速和选择性结合线粒体。一旦进入线粒体，被超氧化物氧化，与核酸结合后产生很强的红色荧光。

MitoSOX Red能够立即被超氧化物，并不是其他ROS-或RNS（活性氮）生成系统氧化。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）能够预防MitoSOX Red被氧化。

MitoSOX Red可用于在对活细胞线粒体释放的超氧化物的直接检测中区别纯化线粒体的人为误差。另外，MitoSOX Red是一种有价值的工具，用来筛选多种疾病中调节氧化应激的药物。

产品特点

•容易为超氧化物而不是其他的ROS、RNS生成系统氧化

•吸收波长⁄发射波长最大值：~510⁄580 nm

•用于活细胞成像

•快速选择性靶向线粒体

产品特性

分子式：C43H43N3IP

分子量：759.71

外观：棕色固体（tan solid）

溶解性：DMSO（5 mM），往50 μg粉末内加入13 μl DMSO即可制成5mM储存液。

注意事项：整个操作过程需注意避光。

使用方法

1.储存液的配制

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简单低速离心使溶液降至管底。之后用13μl高质量无水DMSO溶解MitoSOX Red（50μg/管），混匀后即得到5mM储存液。储存液可根据单次用量分装，≤-20°C避光保存，尽量避免反复冻融。

2.真核活细胞标记步骤

以下实验步骤是专门开发用于爬片培养的牛肺上皮细胞（BPAE）、MRC5人肺成纤维细胞和小鼠3T3成纤维细胞，其他细胞类型可做适当调整。建议以下步骤仅作起始条件，根据实际需求做优化调整。

2.1制备5μMMitoSOX Red工作液：用HBSS/Ca/Mg或适当缓冲液稀释储存液到5μM工作液。

【注意】：MitoSOXRed工作浓度不要超过5μM，否则可能产生细胞毒性效应，包括改变线粒体形态和荧光素重新分配到细胞核和细胞质。

2.2细胞加载：取1-2ml 5μMMitoSOX Red工作液以覆盖爬片培养的细胞为准。37℃避光孵育10min。

2.3细胞清洗：用预热的缓冲液轻轻清洗细胞3次。

2.4准备观察：按需加入复染剂染细胞，之后封片，进行荧光成像（Ex/Em=510/580nm）。