Lyso-Tracker Red为采用Molecular Probes公司的DND-99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光探针，其中仅弱碱可部分提供质子，以维持pH在中性,可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性红(Neutral Red)和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶橙的染色缺乏特异性。Lyso-Tracker Red适用于活细胞溶酶体的荧光染色，但不适合用于固定细胞溶酶体的荧光染色。

使用说明：
1.Lyso-Tracker Red工作液的配制：
a.取少量Lyso-Tracker Red按照1:13333-1:20000的比例加入到细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，使最终浓度为50-75nM。例如取1µl Lyso-Tracker Red加入到20ml或13.33ml细胞培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中。混匀后即为Lyso-Tracker Red工作液。
b.Lyso-Tracker Red工作液使用前需37℃预温育。
注：工作液中Lyso-Tracker Red的浓度可以根据实际情况进行适当调整。为降低背景，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的Lyso-Tracker Red。
2.溶酶体的荧光标记：
a.去除细胞培养液，加入步骤1配制好的并37℃预温育的Lyso-Tracker Red染色工作液，与细胞37℃共孵育20-120分钟。
b.去除Lyso-Tracker Red染色工作液，加入新鲜的细胞培养液。
c.随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到溶酶体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果欠佳，可以提高Lyso-Tracker Red染色工作液中Lyso-Tracker Red的浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。

注意事项：
Lyso-Tracker Red (1mM)在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。对于微量的液体，每次使用前先离心数秒钟，使液体充分沉降到管底。
荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
Lyso-Tracker Red适用于活细胞溶酶体荧光染色，但不适合用于固定细胞溶酶体的荧光染色。如果经Lyso-Tracker Red染色后的细胞需要进行固定操作，可以尝试3%的戊二醛(glutaraldehyde)。

C₂₀H₂₄BF₂N₅O