链霉亲和素磁珠，也称 Streptavidin 磁珠或 SA 磁珠，是粒径为 200nm 的纳米磁珠表面上共价结 合了大量的高质量的链霉亲和素（Streptavidin）。纳米 级磁珠提供的超大比表面积，具有更多的结合位点，磁珠 使用量更少，非特异性吸附率低，可以快速、高效、灵敏、 特异性地与生物素（Biotin）标记的抗体、核酸、蛋白、 多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化生物素标记 的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等，用于免疫沉淀（IP）、 细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。 

操作流程

（一）结合生物素化分子操作流程

1. 使用前准备

1.1 缓冲液：以下是常用的缓冲液成分，用户可根据需要 调整盐浓度和 pH

1.2 磁力架、漩涡振荡器、旋转混合仪、移液器、枪头及 离心管

2. 结合生物素化核酸

2.1 将磁珠置于漩涡振荡器上 20s，振荡重悬磁珠。用移 液器移取 100μL 磁珠到新的离心管中。将离心管置于磁力 架上，静置 1min（此操作后续简称为磁性分离），用移 液器吸去上清液，从磁力架上取下离心管。

2.2 加入 1mL Buffer 1 到离心管中，盖上离心管盖，充分 振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。

2.3 重复“步骤 2.2”一次。

2.4 加入 500μL 的用 Buffer 1 稀释的生物素化核酸，充分 振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混 合 30min。

2.5 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。按“步骤 2.2” 的方法洗涤磁珠 3 次。

2.6 根据后续实验的要求，加入合适的低盐缓冲液，重悬 磁珠。至此结合生物素化核酸步骤完成。磁珠可用于后续 操作。

2.7 用户可以通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到 磁珠上的核酸量（反应前浓度-反应后浓度）×反应溶液体 积。

3. 结合生物素化抗体/蛋白

3.1 将磁珠置于漩涡振荡器上 20s，振荡重悬磁珠。用移 液器移取 100μL 磁珠到新的离心管中。将离心管置于磁力 架上，静置 1min（此操作后续简称为磁性分离），用移 液器吸去上清液，从磁力架上取下离心管。

3.2 加入 1mL Buffer 2 到离心管中，盖上离心管盖，充分 振荡重悬磁珠。磁性分离，移去上清液。

3.3 重复“步骤 3.2”两次，共洗涤 3 次。

3.4 加入 1mL 的用 Buffer 2 稀释的生物素化抗体/蛋白， 充分振荡重悬磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋 转混合 60min。

3.5 磁性分离，将上清液转移至新的离心管。按“步骤 3.2” 的方法洗涤磁珠 5 次。

3.6 根据后续实验的要求，加入合适的缓冲液，重悬磁珠。 至此结合生物素化抗体/蛋白步骤完成。磁珠可用于后续操 作。

（二）生物素化抗体免疫沉淀操作流程

注意：缓冲液自行准备或直接购买我司 IP 试剂盒。 免疫复合物的制备

注意：样品所需的量和孵育时间均依赖于每个特定的抗体抗原体系，因而可能需要优化才能得到最大产量。

以下实验方案针对 2∽10μg 生物素化抗体，根据需要 可以按比例放大。

1. 在离心管中，将每个样品的细胞裂解液与 2∽10μg 生物 素化抗体结合。每个免疫沉淀反应推荐的总蛋白量为 500 ∽1500μg。

2. 用IP Lysis/Wash Buffer将抗体以及制备好的样品稀释 至 300∽500μL。

3. 在室温下孵育 1∽2h，或 4℃ 2∽4h，以形成免疫复合 物。

免疫沉淀：

注意：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡 旋混匀瓶中磁珠。

1. 将 20∽50µL 的 Biolinkedin® 链霉亲和素磁珠加入 1.5mL 离心管中。

2. 向磁珠中加入 500µL 预冷 PBS，轻柔混匀。

3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除 上清。

4. 向离心管中加入 200∽500µL IP Lysis/Wash Buffer。 颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀 1min。用磁力架收集磁 珠。去除上清。

5. 将抗原样品/抗体混合物加入装有磁珠的离心管中，保 持混匀室温下孵育 1∽2h，或 4℃ 2∽4h。

6. 用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。

7. 向离心管中加入 1000µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔 混匀磁珠 5∽10min。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。

8. 变性洗脱：向离心管中加入 80∽100µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于 100℃水浴 或者金属浴中加热 10min。通过磁力架分离磁珠，保留含 有目的抗原的上清。

备注:如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。 低 pH 洗脱：向离心管中加入 100µL Elution Buffer。保 持混匀在室温下孵育离心管 5∽10min。通过磁力分离磁 珠，保留含有目的抗原的上清。每 100µL 洗出液中加入 20µL Neutralization Buffer 来中和低 pH。

注意事项

1. 进行实验操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。

2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠 聚集而降低结合能力。

3. 实验中 SA 与生物素化分子结合的能力是有区别的，结 合还会受到 Buffer 的影响，因此可自行优化操作细节或者 筛选及配制缓冲液进行实验。

4. 如需生物素分子与 SA 磁珠分离，可采用：

① 0.1% SDS，煮沸 5min；② pH=8.2，含 95%甲酰胺 的 10mM EDTA 中，65℃5min 或 90℃2min。脱落率 95%。

5. 磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液 中，防止干燥。

6. 本产品仅供科学研究使用。