产品特点

   快速高效：免疫磁珠阴性分选，15 min 完成（Cocktail 10 min + Beads 2.5 min + 磁极 2.5 min）；

   高纯度高活性：纯度可从分选前 43.0% 提升至分选后 98.1%（人 PBMC），分选细胞无异常激活；

   无需裂红：使用前无需裂红处理（PBMC 层不含红细胞），直接倾倒法操作即可；

   无表面标记：阴性分选不接触目的细胞表面，CD4+ T 细胞表面不结合任何抗体/磁珠，保持原始静息状态；

   配套完整：与单孔磁力架 +细胞分选缓冲液配套使用，开盒即用。

产品使用说明

   该操作流程适用于处理 0.1-2 mL 的样品

操作流程（PBMC 起始，倾倒法）：

       1. 制备人 PBMC：利用 Ficoll 密度梯度离心法从人外周血中分离 PBMC，收集 PBMC，以 PBS 洗涤细胞，离心后将 PBMC 重悬于分选缓冲液          中，调整细胞密度为 1×10⁸ cells/mL。

          · 如果使用的是冻存的 PBMC，复苏后细胞成团块状，分选前样品需在室温下用浓度为 100 μg/mL 的 DNase I 溶液孵育至少 15 min 并用细          胞筛过滤。

          · 分选缓冲液推荐使用含有 1 mM EDTA 和 2% 胎牛血清（FBS）的 PBS，需预先使用 0.22 μm 滤膜过滤除菌。缓冲液中不能含有钙离子、镁         离子和生物素。

      2. 吸取 100 μL 细胞悬液（1×10⁷ cells）加至流式管底部，加入 10 μL Human CD4+ T Cell Isolation Cocktail，混匀，室温孵育 10 min。

          · 若分选更大数量的细胞可按比例增加 Human CD4+ T Cell Isolation Cocktail 的用量。

      3. 加入 10 μL Streptavidin Beads（使用前需涡旋震荡约 30 s，混匀后不可高速离心），混匀，室温孵育 2.5 min。

          · 若分选更大数量的细胞可按比例增加 Streptavidin Beads 的用量。

      4. 加入分选缓冲液补至 2.5 mL，吹打混匀后流式管插入磁力架中静置 2.5 min。

          · 实验体系不可超过 2.5 mL，以避免超过磁极的分选范围。

      5. 拿起磁力架，轻柔、连贯地倾倒细胞悬液于无菌离心管中，磁极及流式管在倾倒状态下保持 2-3 s 后恢复正立。此悬液中即包含纯化的人               CD4+ T 细胞。

          · 倾倒过程中流式管不能脱离磁力架。

          · 请勿摇晃或通过管口接触可能仍挂在流式管口的液滴。此液滴应丢弃。

      6. 洗涤细胞后重悬于所需缓冲液或培养基，即可用于下游实验。